
单细胞测序技术正在革命性地推动我们对生命复杂性的认知,然而其高昂的每样本成本和技术复杂性,限制了其在更多实验室和更广泛物种中的普及。尽管多重样本标记技术能有效“降本增效”,但现有的方法往往受限于表面抗原鱼类特情人、寡核苷酸呈现制造费激昂或控制流量多样化。近日,南方海洋科学与工程广东实验室(广州)的陈凯讲师管理团队在Journal of Genetics and Genomics上发表了一项创新性方法学研究,提出了一种名为HEATag的新型样本标记策略,为我们提供了一个低直接费用、跨种类、全手机平台兼容的全新解决方案。
学术期刊百科
Journal of Genetics and Genomics (JGG)是由国有实验院基因显性基因规律基因与胸部发育菌物学探索所和国有基因显性基因规律基因直到学会承办的国际英文学术研究交流杂志论文刊物论文,锐意创新于新闻人的一生实验和临床基因显性基因规律基因学前沿技术行业的媚足性探索成效。JGG 2028年度干扰系数7.1,Scopus学术研究交流杂志论文刊物论文口碑指标图CiteScore 9.9,位于JCR 2028年度GENETICS & HEREDITY前沿技术行业Q1区(Top 10%),BIOCHEMISTRY & MOLECULAR BIOLOGY前沿技术行业Q1区,位于国有实验院杂志论文刊物论文系统盘菌物学类项1区(Top杂志论文刊物论文),基因显性基因规律基因学和怪物化与团伙菌物学小类双1区。BIOPROFILE
哪些是HEATag
合理的“二合并”设计方案
HEATag是由凝集素和HUH内切酶组合的相结合蛋清
「定位手机器」接口 - 凝集素
能够识别细胞膜上广泛存在且高度保守的糖基化修饰语(如GlcNAc和Neu5Ac)。
「接连器」包块 - HUH内切酶
可以序列特异性地与普通的、无需化学修饰的单链DNA(ssDNA)检索条型码来共价接连。
“1+1>2”的郊果:将两者融合,得到的HEATag蛋白既能通过凝集素牢牢锚定在细胞膜上,又能通过HUH蛋白携带特定的DNA条形码进行样板标志与产品追溯。
Fig1: HEATag众多标上方式示想法图
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实际的定期检查
HEATag才是有可以打?
可能在不同于具体条件下,保证 蒲乳期节肢动物组织核系单组织核混样测序
实验室里的设计再精妙,也要经过真实样本的 “实战考验” 才算数。研究分析管理团队为 HEATag 布置了多轮 “气压检查”,从细胞结构膜系到细胞结构膜核,从干燥到高温,从新鲜模本到稳明确模本,全八卦方位查证它的稳明确性和安全质量。
第二轮测验对於哺乳期间软体动物神经人体神经细胞系:理论研究的人员取舍了位于人、鼠、仓鼠多个植种群类的哪几种神经人体神经细胞(HEK293T、K562、MEF、CHO),在环境温度下能 HEATag 图标后结合测序。以后环保再生资源回收的 11447 个神经人体神经细胞中,85.66% 都能按照 HEATag 长商品条码为准配比到原植种群类,样版间相交造成的污染不多,UMAP 聚类剖析法剖析还有会直接声明书,HEATag 长商品条码与植种群类特异形人类基因组优点层面不符。 立刻,各种测试必备标准进一大步版本升级:探析职工试穿在 4℃下标注鲜活人体内部、在在常温下标注甲醇比较固定好人体内部,而且进行标注人体内部核。效果依旧会完美:全部的必备标准下,样例价签与动物群数据信息均极具特好的重要性性,分割准确性率超 95%。殊不知甲醇比较固定好会诱发较轻的转录本相交的污染,人体内部核化学合成出现极少量 RNA 溜走,人体内部结构类型的引用效果依旧会与鲜活样例保证保持一致,说明 HEATag 能够标注的不同操作必备标准下的调查样例。
Fig2: HEATag 可在有所不同经济条件下完整单内部转录组混样阐述
够符号喂乳生物和海洋资源无脊柱生物的原代组织细胞
假设说肿瘤细胞核系测试测试是 “条件题”,那团队样版只是 “额外题”, 以上样版之所以因肿瘤细胞核型非常复杂、环保适宜性特别,为标记图片技术应用的 “思路”,而 HEATag 刚好在以上 “思路” 上创造了优质。研究团队选择了大鼠和小鼠的睾丸聚集,这类样本包含精原干细胞、精母细胞、精子细胞等多种类型,对标记一致性的要求极高。实验中,两种动物的睾丸用特异性 HEATag 条形码标记后混合测序,最终获得的 14663 个细胞不但能被精确划分,大部分一般受损细胞方式的聚类分析结局都清新可辨。
更令人惊喜的是HEATag对海域菌物的匹配性。HEATag能在海水的等渗溶液中标记新鲜的海洋动物细胞(如海月水母、大西洋海刺水母)。研究人员用人工海水稀释的HEATag 标记了水母和珊瑚的组织细胞后在 BD Rhapsody 平台测序,最终回收的 6452 个细胞中,HEATag 长形码与动物群转录组都具有较高保持一致,还没有产生因高盐生态环境造成的的 “标出没用”。后续对甲醇固定的海洋生物细胞测试结果显示,HEATag 在固定样本中的拆分效果优于新鲜样本。
Fig3: HEATag 可达成母乳喂养動物集体样板多沉 scRNA-seq 具体分析
Fig4: HEATag可控制新鲜毛肚浅海无脊梁骨甲壳动物很多 scRNA-seq 具体分析
HEATag与组织的综合不能吸引转录组的有效影响
对样本标记技术来说,“不影响样本本身的 RNA 特征” 是底线。研究团队将来自同一供体的等量的 HEATag 标记细胞与未标记细胞混合测序,对比两者的 RNA 质量、基因捕获数量和细胞组成。结果显示,标记组与未标记组的 RNA 质量没有明显差异,捕获的基因数量基本持平,UMAP 图谱显示两组样本的细胞组成高度相似,转录相似性更是维持在高位。无论是细胞簇的注释结果,还是不同细胞类型的基因回收数量,两组都几乎一致,没有出现 “标记导致的基因表达异常”。这意味着,HEATag在来完成标记图片主线任务的还,不想对之后的的转录成分析会造成串扰,绝对了深入分析数剧的真实的性。
Fig5: HEATag并不会作用样例的 RNA 把你想表达出来模式英文
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未來可期
HEATag 能为单上皮细胞研究分析造成哪些?
HEATag 的价值量,远不绝于 “完成箭头难题”,它的迟钝性和共通性,也正在为单受损细胞研究分析使用较多将会性
从用不一样来瞧
HEATag 能遍布从 “简单特别解析”(如癌策划 与很正常策划 、中成药净化处理与對照)到 “大具市场规模性论述”(如策划 组织图谱画出、高通骁龙量淘汰)的全的范围使用需求。跟随 PIP-seq、Stereo-cell 等新型产品可括展新技术的的发展,HEATag 还能进的一步完善单组织论述的通量,助力器教学科研开发团队展开更广具市场规模性的内容。从跨科技领域竟争力分析
HEATag 除了不适广泛用于转录组学,还能与表观遗传基因组学、淀粉酶质组学、空間组学等的技术设备整合,经过制作指数和寡核苷酸队列,HEATag 可能高效加入各种不同的组学步奏,不导致无线信号采集纵深。的同时,系统设计HEATag还可能的发展单组织细胞糖组学调查的技术设备。BIOPROFILE
加盟动态性
拜谱生物体与陈凯讲解实现初阶段的合作有意向的客户
必玩喜爱的是,在 HEATag 技能表流露出庞大技艺利用竟争力的大环境下,拜谱生态学体已与男方浮游微生物环境合理与市政工程杭州科学试验室(武汉)陈凯博士生导师完成率过程协议意想。买卖双方规划环绕着 HEATag 技能的制造业化落子、科技探析事业转变等的方向而铺展开的深层次合作,推进这一个低资金、跨种群的单肿瘤组织细胞膜标签技能更迅速技艺利用于具体情况科技探析事业不一样,为非常多科学试验室带来了效率高、条件的单肿瘤组织细胞膜探析生产工具,机械助力科技探析事业事业者在肿瘤组织细胞膜生态学体学、浮游微生物环境生态学体学、疾病症状长效机制等层面选取非常多推动